دستهبندی: کیت آزمایش بیوشیمی
برچسبها :
حجم محصول:500 میل
کیت بیوشیمی زیست شیمی - توتال هموگلبین
ZiestChem Biochemistry kit - Total Hemoglobin
مشخصات
حجم محصول
500 میل
توضیحات
هموگلوبین
تعریف. هموگلوبین (Hb) پروتئین موجود در گلبولهای قرمز خون است که وظیفه رساندن اکسیژن به بافتها را بر عهده دارد. برای اطمینان از اکسیژنرسانی کافی بافت، سطح هموگلوبین کافی باید حفظ شود. مقدار هموگلوبین در خون کامل بر حسب گرم در دسیلیتر (g/dl) بیان میشود.
هموگلوبین (Hb) از چهار زنجیره گلوبین ساخته شده است که هر کدام حامل یک گروه هم هستند. توسط گلبولهای قرمز خون حمل میشود و اکسیژن را از ریهها به بافتهای محیطی منتقل میکند تا بقای سلولها را حفظ کند. کمیت هموگلوبین خون یک پارامتر تشخیصی کلیدی برای بیماریهای مختلف مانند کمخونی، پلی سیتمی و کمآبی بدن بوده است.
روشهای ساده، مستقیم و آماده اتوماسیون برای اندازهگیری غلظت هموگلوبین در تحقیقات و کشف دارو رایج شدهاند. کیت سنجش هموگلوبین بر اساس روش بهبودیافته تریتون/NaOH است که در آن هموگلوبین به محصول نهایی با رنگ یکنواخت تبدیل میشود. شدت رنگ، اندازهگیری شده در ۴۰۰ نانومتر، با غلظت هموگلوبین در نمونه نسبت مستقیم دارد. فرمول بهینهسازیشده حساسیت بالایی از خود نشان میدهد و تداخل مواد در نمونههای خام را به طور قابلملاحظهای کاهش میدهد.
اهمیت اندازه گیری هموگلوبین
مقدار هموگلوبین تام tHb در گلبولهای قرمز (RBCS) یک معیار مهم برای ظرفیت انتقال اکسیژن خون است.
هنگامی که مقدار هموگلوبین به طور ناگهانی به دلیل خونریزی کاهش مییابد، اکسیژنرسانی به بافت نمیتواند بهدرستی حفظ شود؛ بنابراین، اندازهگیری دقیق tHb در محیطهای اورژانس، جراحی و مراقبتهای ویژه برای درک وضعیت فعلی بیماران مبتلا به خونریزی حیاتی است و مهمترین شاخص برای تعیین نیاز به تزریق محصولات RBC است.
ما قبلاً موردی را تجربه کردیم که در آن همولیز پس از انفوزیون یا انتقال خون در طی اکسیژنرسانی غشای خارج بدنی وریدی شریانی (VA ECMO) مشاهده شد، و مقدار tHb بین روشهای اندازهگیری هدایت و جذب متفاوت بود؛ بنابراین، مقدار tHb با وضعیت بیمار و وضعیت درمان مطابقت نداشت.
هموگلوبین تام tHb بالا:
هموگلوبین بالاتر از نرمال سطح هموگلوبین بالا اغلب ناشی از سطوح پایین اکسیژن در خون (هیپوکسی) است که در یک دوره زمانی طولانی وجود دارد. دلایل رایج عبارتاند از بیماری مغز استخوان که باعث افزایش غیرطبیعی گلبولهای قرمز خون (پلیسیتمیورا) و بیماری مادرزادی قلبی میشود.
هموگلوبین تام tHb پایین:
اگر بیماری یا شرایطی بر توانایی بدن شما برای تولید گلبولهای قرمز تأثیر بگذارد، سطح هموگلوبین شما ممکن است کاهش یابد. هنگامی که سطح هموگلوبین شما پایین است، به این معنی است که بدن شما اکسیژن کافی دریافت نمیکند و باعث میشود که احساس خستگی و ضعف کنید.
روش محاسبه هموگلوبین کل:
ADVIA یک هموگلوبین (هموگلوبین محاسبه شده) را از CHCM محاسبه میکند.
calculated hemoglobin = (CHCM x MCV x RBC count) ÷ ۱۰۰۰.
در این روش رسانایی اختلافپتانسیل بین دو الکترود در یک نمونه خون را اندازهگیری میکند. این اختلافپتانسیل باتوجهبه رابطه معکوس مشخصه بین رسانایی و تعداد و اندازه گلبولهای قرمز در نمونه به مقدار هماتوکریت تبدیل میشود و سپس tHb محاسبه میشود؛ بنابراین، نتایج هدایت بهعنوان هماتوکریت در نظر گرفته میشود.
بااینحال، این روش ممکن است تحتتأثیر تغییرات در غلظت الکترولیت در غیاب تغییرات tHb باشد؛ بنابراین، باتوجهبه شرایط بیمار و درمان، در مورد اطمینان این روش در بیماران با عدم تعادل الکترولیتی تردید وجود دارد. ما باید تشخیص دهیم که اختلاف بین مقدار هماتوکریت و tHb در روش هدایت رخ خواهد داد.
روش دیگر، روش جذب تحتتأثیر غلظت الکترولیتی در غیاب تغییرات tHb نیست. بااینحال، در روش اندازهگیری جذب، پس از همولیز شدن کامل گلبولهای قرمز توسط امواج اولتراسونیک، tHb از طریق جذب نور اندازهگیری میشود، بنابراین تشخیص هموگلوبین از گلبولهای قرمز همولیتیک و آزاد شده از گلبولهای قرمز عملکردی غیرممکن است.
|
روش آزمایش |
بلانک معرف |
نمونه |
|
معرف درابکین |
۵/۲ میلی لیتر |
۵/۲ میلی لیتر |
|
خون |
– |
۱۰ میکرو لیتر |
|
خوب مخلوط کرده، ۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه کرده، جذب تست را مقابل بالنک معرف در طول موج ۵۴۶ نانومتر بخوانید. رنگ در صورت نگهداری دور از نور ۶۰ دقیقه پایدار است. |
||
محاسبه با استفاده از فاکتور:
Hb (g/dl): A Sample × ۳۶.۸
روش رسم منحنی استاندارد:
کیت را از یخچال خارج و محتویات آن را به دمای اتاق برسانید. ۵ لوله آماده کرده و رقت های استاندرد زیر را بصورت دوپلیکیت تهیه و بطریق زیر عمل نمائید:
|
لوله |
ارزش استاندارد (g/dl) |
استاندارد (میلیلیتر) |
محلول درابکین (میلیلیتر) |
|
۱ |
۰ |
۰ |
۱ |
|
۲ |
۸ |
۰.۴ |
۰.۶ |
|
۳ |
۱۲ |
۰.۶ |
۰.۴ |
|
۴ |
۱۶ |
۰.۸ |
۰.۲ |
|
۵ |
۲۰ |
۱ |
۰ |
|
خوب مخلوط کرده، جذب را مقابل محلول درابکین در طولموج ۵۴۶ نانومتر خوانده و یادداشت نمایید. منحنی استاندارد به نحوی ترسیم گردد که غلظت استاندارد بر محور افقی و OD بر محور عمودی منحنی ثبت گردد. |
|||
محاسبه با استفاده از منحنی استاندارد HiCN:
روش پیشنهادی مورد تأیید ICSH استفاده از منحنی استاندارد است ، جذب تست را مستقیماً از روی منحنی استاندارد بخوانید.
هر بار که از یک کیت با شماره ساخت جدید با دستگاه اسپکتروفتومتر جدید استفاده میشود باید منحنی جدید رسم کرد.
|
مقادیر طبیعی: |
|||
|
مردان |
(۱۴-۱۸) g/dl |
اطفال |
(۱۰-۱۵) g/dl |
|
زنان |
(۱۲-۱۶) /dl |
نوجوان |
(۱۱-۱۴) g/dl |
|
نوزادان |
(۱۶-۲۵) g/dl |
|
|
توصیه میشود هر آزمایشگاه خود اقدام به تهیه مقادیر طبیعی نماید.
کنترل کیفی: جهت کنترل کیفی کیت توتال هموگلوبین زیست شیمی میتوان از کنترلهای خونی که با این روش تیتر شدهاند استفاده نمود.
خصوصیات علمی کیت توتال هموگلوبین زیست شیمی:
|
حد سنجش |
۲۰ g/dl |
|
حساسیت |
۰.۲ g/dl |
|
صحت: در مقایسه با کیت و کنترلهای معتبر مشابه r= 0.998 y= 1.002 + 0.1 |
|
|
دقت WITHIN – RUN (n=20) |
|
||
|
CV% |
S.D (g/dl) |
Mean (g/dl) |
|
|
۳.۹ |
۰.۴ |
۱۰.۲ |
Sample I |
|
۳.۶ |
۰.۵ |
۱۳.۸ |
Sample II |
|
دقت Between – Day (n=20) |
|
||
|
CV% |
S.D (g/dl) |
Mean (g/dl) |
|
|
۵.۱ |
۰.۵ |
۹.۹ |
Sample I |
|
۴.۵ |
۰.۶ |
۱۳.۳ |
Sample II |
نقد و بررسی
کاربرد هموگلوبین تام tHb
-
- سنجش مستقیم: هموگلوبین تام tHb در خون، سرم، پلاسما، ادرار و غیره.
- فارماکولوژی: اثرات داروها بر متابولیسم هموگلوبین.
- کشف دارو: HTS برای داروهایی که سطح هموگلوبین را تعدیل میکنند.
کیت Total Hemoglobin
حساس و دقیق: محدوده تشخیص خطی هموگلوبین ۰.۹ تا ۲۰۰ میلی گرم در دسی لیتر در روش پلیت ۹۶ چاهی.
ساده و با کارایی بالا: روش “مخلوط و خواندن” شامل افزودن یک معرف واحد است.
و خواندن چگالی نوری میتواند بهآسانی بهعنوان یک سنجش با توان بالا در صفحات ۹۶ چاهی خودکار شود برای هزاران نمونه در روز.
ایمنی: معرفها غیرسمی هستند.
تطبیقپذیری: سنجشها را میتوان در صفحه یا کووت ۹۶ چاهی اجرا کرد.
SpHb چگونه کار میکند؟
SpHb که بخشی از تکنولوژی ویژه جهت اندازهگیریهای غیرتهاجمی است، از طولموجهای متعدد نور از طریق سنسور پالس CO اکسیمتری استفاده میکند تا دادههای تشکیلدهنده خون را از طریق جذب نور به دست آورد.
الگوریتمهای پردازش سیگنال پیشرفته و فیلترهای تطبیقی منحصربهفرد با هم کار میکنند تا هموگلوبین (SpHb) و اشباع اکسیژن (SpO2) ، علاوه بر متوگلوبین (SpMet) ، نرخ پالس (PR) ، شاخص پرفیوژن (Pi) ، شاخص تنوع کامل (PVi) و سایر پارامترها – همه در زمان واقعی را ارائه دهند.
روش SpHb با دید بیشتر ترکیبات خون، پزشکان را قادر میسازد تا تغییرات هموگلوبین را بین نمونههای خون تهاجمی نظارت کنند.
نظارت بر روند SpHb ممکن است بینش بیشتری بین نمونههای خون تهاجمی فراهم کند که:
روند SpHb ثابت است و در غیر این صورت پزشک ممکن است فکر کند هموگلوبین در حال کاهش است.
روند SpHb در حال افزایش است و در غیر این صورت پزشک ممکن است فکر کند هموگلوبین بهاندازه کافی سریع افزایش نمییابد.
روند SpHb در حال کاهش است و در غیر این صورت پزشک ممکن است فکر کند هموگلوبین ثابت است.
مزایای SpHb
دسترسی مداوم به سطوح هموگلوبین Hgb در زمان واقعی یک مزیت آشکار نسبت به روشهای اندازهگیری سنتی است، زیرا پزشکان را قادر میسازد تغییرات در سطوح Hgb را بهسرعت تشخیص داده و استراتژیهای مدیریت بالینی را بر اساس آن تنظیم کنند.
اگرچه روش سیانمتاگلوبین توصیه شده توسط ICSH برای اندازهگیری هموگلوبین استفاده میشود، اما وجود سیانید پتاسیم در فرمولاسیون، خطر سمی برای مصرفکننده و از نقطهای دفع بیخطر آن است. Prietest Hemoglobin – SLS فاقد سیانید پتاسیم است که یک معرف پایدار و غیرسمی است.
SLS غشای گلبول قرمز را مختل میکند و باعث تغییر هموگلوبین توسط SLS از طریق یک واکنش اکسیداسیون میشود که منجر به یک کمپلکس SLS-هموگلوبین پایدار میشود. این کمپلکس بهصورت فتومتریک در ۵۴۰ یا ۵۴۶ نانومتر اندازهگیری میشود. تبدیل کل به کمپلکس SLS Hemoglobin بسیار سریع است و SLS متوگلوبین را به طور کامل تبدیل میکند و نتایج غلظت هموگلوبین را به دست میدهد که با روش سیانمتاگلوبین قابل مقایسه است.
مشخصات کیت توتال هموگلوبین زیست شیمی
اندازهگیری هموگلوبین در خون تام در کیت Total Hemoglobin زیست شیمی با روش کلومتریک انجام میشود.
اهمیت کلینیکی کیت توتال هموگلوبین زیست شیمی:
هموگلوبین یک پروتئین پورفیرین با آهن (II) ظرفیتی است که انتقال گازهای 2O و 2CO بین ششها و سایر بافتها را انجام میدهد، لذا یک غلظت کافی از آن ضروری است. غلظت هموگلوبین در خونریزیها، همولیز گلبولهای قرمز و یا نقص در تولید خون در مغز استخوان کاهش پیدا میکند و برعکس در موارد اختلال در تبادل گازها در ریه و یا نارساییهای دیگر ریوی مقدار آن بالا میرود. اندازهگیری هموگلوبین خون در مراحل اولیه کمخونی به تشخیص آن کمک میکند.
اساس روش کیت Total Hemoglobin:
روش: HiCN Method/Colorimetric
روش کیت توتال هموگلوبین زیست شیمی بهعنوان رفرنس ICSH شناخته میشود. در این روش خون لایز میشود و هموگلوبین آزاد میگردد ۲+Fe آن توسط فری سیانور به مت هموگلوبین Fe3+ تبدیل میشود و در ادامه فرایند توسط KCN سیان مت هموگلوبین که ترکیب با دوامی است ایجاد میشود. جذب سیان مت هموگلوبین متناسب با مقدار هموگلوبین موجود در نمونه است طولموج در ۵۳۰-۵۵۰ نانومتر اندازهگیری میشود.
معرفها:
|
Storage/ Avoid freezing |
Amount |
Presentation-500 mL |
||
|
۲-۸ °C |
۱* ۱۰ ml |
Reagent 1 (50X) |
R1a |
Hb |
|
۲-۸ °C |
۱* ۱۰ ml |
Reagent 2 (50X) |
R1b |
Hb |
|
۲-۸ °C |
۱* ۱۰ ml |
Standard (20 g/dl) |
Hb |
|
آمادهسازی معرفها / پایداری/ امحا پسماند
محلول کار (درابکین): نسبت به نیاز ۱ میلی لیتر R1a و ۱ میلی لیتر R1b را به بالن ژوژه ۵۰ میلی لیتر انتقال داده و با آب مقطر به حجم برسانید pH آن میبایست ۷.۲±۰.۲باشد (این محلول دور از نور در دمای ۱۵-۲۵ درجه سانتیگراد ۳ ماه پایدار است) / پسماند کیت را با آب رقیق نموده و در فاضلاب شهری تخلیه کنید (دستورالعمل مدیریت پسماندهای آزمایشگاهی ۲ مرجع سلامت)
هشدار ایمنی: محلول حاوی سیانور بوده و بسیار سمی است از برخورد با پوست بدن، چشم و دهان در حین کار جلوگیری شود و در صورت اتفاق محل را با آب فراوان شستشو دهید.
نکات قابلتوجه:
محلول آماده درابکین شفاف و به رنگ زرد روشن است. جذب آن در طولموج ۵۴۶ نانومتر صفر خوانده میشود، در صورت مشاهده کدورت و یا بیرنگ شدن آن را دور بریزید.
اطراف سرسمپلر یا پیپتهای مورداستفاده را از خون بادقت پاک کنید و آن را داخل محلول درابکین چندین بار پیپتاژ بنمایید.
نمونه مورد آزمایش:
خون تام (از هر نوع ضدانعقاد جهت انجام آزمایش میتوان استفاده کرد.) لازم به ذکر است که از ضد انعقادها بهصورت خشک استفاده شود، در غیر این صورت ضریب رقت در محاسـبه منظور گردد.
پایداری نمونه ۶ روز در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد میباشد .
پارامترها:
دما:۲۵ ۱۵ درجه سانتیگراد
طول موج: 546 نانومتر
کووت : 1 سانتی متر
حجم نمونه : 10 میکرولیتر
حجم معرف : 2.۵ میلی لیتر
خوانش: مقابل بالنک معرف
نوع واکنش: افزایشی.
نظرات
دستهبندی: کیت آزمایش بیوشیمی
برچسبها :