کیت بیوشیمی زیست شیمی - RF

مشخصات کیت RF زیست شیمی

از کیت RF زیست شیمی جهت انجام آزمایش RF و اندازه‌گیری کیفی و نیمه کمی RF در سرم انسانی استفاده می شود.

اهمیت بالینی:

آزمایش RF برای تشخیص بیماری آرتریت روماتوئید مورداستفاده قرار می‌گیرد. در این بیماری آنتی‌بادی‌های تولید شده از جنس IgG به‌عنوان آنتی‌ژن شناسایی می‌شوند. کمپلکس ایجاد شده سیستم کمپلمان و سایر سیستم‌های التهابی را فعال می‌کنند و موجب آسیب مفصلی می‌شوند  در برخی موارد نیز بافت‌هایی مانند عروق خونی، ریه‌ها و اعصاب هم در این التهاب ایمنی درگیر می‌شوند. در بیماری‌های خودایمنی مانند SLE هم آزمایش RF مثبت مشاهده می‌گردد. توبرکلوزیس، هپاتیت مزمن باعث مثبت‌شدن RF می‌شوند.

روش آزمایش RF

کیت RF زیست شیمی از روش Latex Agglutination بهره می برد و اساس روش آن به شرح زیر است.

معرف حاوی ذرات لاتکس پوشیده شده با آنتی‌بادی‌های ضد  RF انسانی در حضور سر بیمار حاوی RF به‌سرعت تشکیل یک آگلوتیناسیون قابل رویت می‌دهد.

محتویات و معرف‌ها:

Presentation: 100 test			Amount	Storage
RF	R1	Reagent 1	۱×۴.۰ ml	۲-۸°C
RF	Positive control		۱×۰.۸ ml	۲-۸°C
RF	Negative control		۱×۱.۰ ml	۲-۸°C
Test cards			1pcs	–
Mixing sticks			50pcs	–

آماده‌سازی معرف‌ها ٫ پایداری امحای پسماند:

• • کیت آماده مصرف است.
  •  معرف‌ها در صورت حفظ درجه حرارت و بسته‌بودن درب تا تاریخ انقضای ثبت شده روی ویال‌ها پایدار هستند.
  • پس از هر استفاده درب ویال‌ها را به‌خوبی ببندید.
  • پسماند کیت  را با آب رقیق نموده و در فاضلاب شهری تخلیه کنید (دستورالعمل مدیریت پسماندهای آزمایشگاهی ۲ مرجع سلامت)

هشدار ایمنی

معرف حاوی ۰٫۰۹٪ سدیم آزاید است از بلعیدن، تماس با پوست و دهان جلوگیری شود.

نکات قابل‌توجه

1. تأخیر در زمان خواندن نتایج می‌تواند سطح RF را به‌صورت کاذب بالا نشان دهد.
2. از سرم لیپیمیک همولیز و ایکتریک در این آزمایش استفاده نشود.
3. اگر خواندن نتایج از زمان تعیین شده بگذرد امکان خشک‌شدن سوسپانسیون لاتکس و جواب غلط وجود دارد. آزمایش را می‌بایست مجدداً تکرار کرد.
4. انجام آزمایش می بایست همراه با استفاده توام از کنترل (+) و (-) باشد.
5. نمونه‌های مثبت می‌بایست با استفاده از سری رقت روش نیمه کمی و سرم فیزیولوژی تیتر شوند.
6. آلودگی میکروبی نمونه‌ها یا کنترل‌ها یا فریز و دفریز باعث جواب غلط شود.
7. برای استفاده مجدد از اسلاید یا کارت توصیه می‌شود آنرا با آب شیر بشوئید تا باقیمانده های آزمایش قبلی شسته شود سپس با آب مقطر آبکشی کنید. از حلال های آلی و پاک کننده ها مطلقاً استفاده نشود.

نمونه مورد آزمایش

سرم

پایداری نمونه ۲ روز در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد و یک ماه در دمای ۲۰ – درجه سانتیگراد است.

روش آزمایش

ارزیابی کیفی:

1. معرف‌ها و نمونه‌ها را به دمای اتاق برسانید و قبل از آزمایش خوب مخلوط کنید.
2. ۵۰ میکرولیتر از معرف لاتکس R را به داخل یک چاهک کارت (اسلاید) بدون تماس با سطح آن ببیت کنید.
3. دقیقاً ۵۰ میکرولیتر از سرم یا محلول‌های کنترل را کنار قطره لاتکس پیپت کنید.
4. با همزن پلاستیکی قطره لاتکس و سرم یا کنترل ها را مخلوط کنید تا کاملا یکنواخت شوند.
5. کارت را ۲ دقیقه با چرخاندن ملایم، ترجیحاً روتاتور بهم بزنید.
6. بعد از ۲ دقیقه تشکیل آگلوتیناسیون را مقابل یک منبع نور قوی بررسی کنید.

 

negative	positive
منفی (-)۸ IU/ml >	مثبت (+)۸ IU/ml ≤

ارزیابی نیمه کمی:

مطابق جدول زیر با استفاده از محلول سرم فیزیولوژی یک سری رقت از سرم بیمار تهیه کنید:
۱/۸	۱/۴	۱/۲	Dilutions
۵۰ µl	۵۰ µl	۵۰ µl	Saline
–	–	۵۰ µl	Sample
۵۰ µl→ ۵۰ µl  →
Transfer on to a circle of a slide:
۵۰ µl	۵۰ µl	۵۰ µl	Diluted
۵۰ µl	۵۰ µl	۵۰ µl	Latex suspension (R1)

ادامه آزمایش را برای هر رقت از مورد ۴ به بعد، مانند روش کیفی انجام دهید. ارزش حدودی را با استفاده از جدول زیر گزارش کنید.

محاسبه:

Sample Dilution				RF Approximate Range
۱:۸	۱:۴	۱:۲	Undiluted	(IU/ml)
–	–	–	–	۸
–	–	+	+	۱۶
–	+	+	+	۳۲
+	+	+	+	۶۴

مقادیر طبیعی:

۸ IU/ml >

کنترل کیفی:

جهت کنترل کیفی می‌توان از کنترل‌های مثبت و منفی داخل کیت استفاده نمود.

خصوصیات علمی کیت:

اختصاصیت تشخیصی: ۹۸ %

حساسیت تشخیصی: ۹۹%

مقایسه روش‌ها:

در مقایسه با کیت و روش معتبر مشابه ۹۷% هم خوانی وجود داشته است.